此前，艾偉拓產品團隊通過多期軟文與視頻，分析了生物制劑中緩沖體系的重要作用及篩選考量，歡迎您前往艾偉拓公眾號對之前的幾篇文章進行回顧。
本期，艾偉拓產品團隊延續(xù)這一話題，對抗體等蛋白制劑在純化工藝中的緩沖體系選擇進行討論。
抗體等蛋白類生物制劑的聚集，可能會影響產品的潛在免疫原性，其電荷異質性也可能影響treatment的安全性和有效性。
此前，我們主要將目光聚焦于成品制劑的穩(wěn)定性。但值得注意的是，抗體蛋白在加工純化等工藝過程中的穩(wěn)定性也需要給予關注。為此，艾偉拓產品團隊結合一篇來自印度理工學院的研究論文，對抗體蛋白純化主要工藝步驟中的緩沖體系選擇進行討論。
01 蛋白A親和層析
蛋白A親和層析是抗體產品純化工藝中普遍存在的捕獲步驟，Protein A的成功是由于其特別而重要的能力，可以有效地捕獲抗體蛋白產物(回收率為95-99%)，同時去除絕大多數(shù)宿主細胞雜質(宿主細胞蛋白質和核酸)。
蛋白A的洗脫通常在低pH下進行 使用SEC（分子排阻色譜）分析抗體聚集(圖1A) 鹽的加入(離子強度~0.2 ~ 0.3 mol/L)幾乎在所有情況下都能突出提高抗體蛋白聚集程度，在30℃時效果更明顯。 由此可以得出初步結論： ① 鹽和高溫的結合導致抗體蛋白聚集性突出增加； ② 與醋酸鹽和甘氨酸緩沖液相比，檸檬酸緩沖液傾向于導致更高的蛋白聚集，特別是在高溫下。 因此，建議在低溫條件下進行蛋白A親和層析并保存層析產物，如果保持在較高的溫度下，則產物保持時間應限制在幾個小時內，盡快進入下一個純化處理步驟。 02 陽離子交換層析 對于抗體類藥物而言，蛋白聚集是較大的不穩(wěn)定性來源。此外，電荷異質性也會導致抗體蛋白的產品異質性。 離子交換層析廣泛應用于抗體蛋白純化工藝，研究表明該步驟中電荷異質性是影響抗體蛋白穩(wěn)定性的主要因素。圖3A為該研究選擇的不同緩沖條件下抗體蛋白電荷異質性隨時間的變化數(shù)據。 從總體上看，隨著時間的推移，主峰含量呈下降趨勢，其中磷酸鹽緩沖液(pH 6.5)的下降幅度較大，磷酸鹽緩沖液(pH 7.5)的下降幅度較小。同時 對于醋酸鹽和檸檬酸鹽緩沖液 在pH為6.5時 從圖3A中也可以看出，在pH為7.5時 03 陰離子交換層析 圖4A顯示了所選擇的不同緩沖條件下(Tris-HCl pH 7.2和Tris-HCl pH 8)主峰含量隨時間變化的數(shù)據?div id="d48novz" class="flower left"> 然而，在pH值為8時，抗體蛋白產物的電荷異質性發(fā)生了相當大的變化，在較高的溫度下變化更大。鹽的存在對主峰含量的影響很小。 圖4B展示了統(tǒng)計建模的結果?div id="d48novz" class="flower left"> 與之前一樣，用pH為8的Tris-HCl緩沖液對數(shù)據構建等高線圖 04 討論 低pH導致抗體蛋白聚集。在遠離pI的低pH條件下 在高pH (pH 8 05 小結 該研究發(fā)現(xiàn) 在常見的蛋白A親和層析條件下，高離子濃度和高溫會導致抗體蛋白聚集突出增加；緩沖體系選擇方面 總而言之 如需了解更多相關信息 艾偉拓20年來始終專注于high-end注射級輔料，長期穩(wěn)定供應注射級TRIS/TRIS-HCl
