論文研究（二）| 緩沖體系可能對(duì)LNP的性質(zhì)與穩(wěn)定性有較大影響

。透析后，LNPs在Amicon Ultra離心過濾裝置中以3000g離心濃縮，分子量截止為100 kDa(Millipore Sigma, Burlington, MA)。
使用Zetasizer Nano ZSP對(duì)LNPs進(jìn)行了水動(dòng)力尺寸、多分散性指數(shù)和表面zeta電位的表征。對(duì)于Zetasizer分析，LNPs在各自的緩沖液中稀釋，得到三次測(cè)量結(jié)果。為了量化mRNA的包封效率和濃度，采用了改進(jìn)的Quanti-iT RiboGreen RNA(Invitrogen)方案。

研究成果
1 緩沖液對(duì)LNP的形成和短期穩(wěn)定性的影響可以忽略不計(jì)
通過標(biāo)準(zhǔn)的微流體混合程序制備含有FLuc mRNA的LNP。DLin-MC3-DMA、DSPC、膽固醇和DMG-PEG-2000脂質(zhì)按50:10:38.5:1.5摩爾比混合，pH 4檸檬酸緩沖液中的mRNA溶液與乙醇脂質(zhì)混合物的體積比為3:1，總流速為9 mL/min。然后將所得的LNP懸浮液分成三等份，分別與PBS、Tris或HEPES進(jìn)行透析。
透析后，將LNPs濃縮，并通過動(dòng)態(tài)光散射(DLS)和改進(jìn)的核糖綠測(cè)定法進(jìn)行分析。
DLS分析顯示，三種緩沖液中LNPs顆粒大小幾乎相同，約為70 nm，PDI約為0.05。
位值表明，PBS和Tris配方的表面電荷略為負(fù)(約?3mV)，HEPES配方的表面電荷為中性，三種緩沖液中包封率均為>92%。
LNP的冷凍透射電鏡顯微照片也沒有顯示任何顯著的形態(tài)變化，這表明緩沖液對(duì)LNP的形成、形態(tài)或短期穩(wěn)定性的影響可以忽略不計(jì)。