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艾基金：用于癌癥給藥的細胞/組織重組脂質(zhì)納米粒子

更新時間：2023-08-22 點擊次數(shù)：2604次

介紹：

納米藥物是設(shè)計更好的藥物遞送系統(tǒng)（DDS）的一種有前景的方法

，而基于細胞/組織的脂質(zhì)載體的開發(fā)是一種有前景的策略

。在本研究中

，作者提出了重組脂質(zhì)納米顆粒（rLNPs）的概念

，并提供了一種簡單的制備方法

。結(jié)果表明

，從細胞（小鼠乳腺癌癥細胞系，4T1）和組織（小鼠肝組織）中制備超小（~20nm）rLNP高度可再生

。作為一個選定的模型平臺

，來源于小鼠肝組織的rLNP可以進一步用成像分子（吲哚菁綠和xiang豆素6）標(biāo)記，并用靶向配體（生物素）修飾

。此外

，rLNPs被證明具有高度的生物相容性，能夠負載各種藥物

，如鹽酸阿霉素（Dox）和姜黃素（Cur）

。最重要的是，Dox負載的rLNPs（rLNP/Dox）在體外和體內(nèi)都表現(xiàn)出良好的抗癌性能

。因此

，rLNPs可能是構(gòu)建不同DDS和治療多種疾病的潛在多功能載體。

制備：

材料：

鹽酸阿霉素Dox

、姜黃素（Cur）

、xiang豆素（C6）、吲哚菁綠（IGG）

、甲基噻唑四氮唑（MTT）

。DSPE-PEG2000-Biotin（艾偉拓（上海）醫(yī)藥科技有限公司），其他沒有具體說明的化學(xué)品和試劑都是從阿拉丁購買

，并且是分析級的

。

艾偉拓AVT在售的DSPE-PEG2000-Biotin來自日本丘比的蛋黃卵磷脂，并且是以蛋黃粉為原料通過先*工藝提取

、純化的磷脂混合物

。

選擇好的磷脂產(chǎn)品可以來艾偉拓（上海）醫(yī)藥科技有限公司看一看，這是一家專營磷脂類gao端藥用輔料的科技公司

，公司旗下產(chǎn)品豐富

，有著技術(shù)專家的專業(yè)支持，能夠及時的解決客戶問題

，助力客戶價值的提升

。

rLNPs的制備：

遵循先前報道的方案，從細胞和組織中提取全脂

，并進行修飾

。簡而言之，將100 mg的新鮮組織（或5x107的細胞）切成片

，裝入500 µL 含有75%甲醇的玻璃均質(zhì)器中

。在0℃下研磨約50次后，將混合物轉(zhuǎn)移到含有另1 mL甲基叔丁基醚（MTBE）的棕色試管中

，將試管放入搖床中1小時

，以便充分提取脂質(zhì)

，然后，向管中加入250 µL純水

，靜置10min進行相分離

，然后在0℃下，15000xg離心15min

，將含有濃縮脂質(zhì)的上部MTBE相轉(zhuǎn)移到另一個新的棕色試管中

，并使用吹氮儀器進行干燥。

將得到的脂質(zhì)溶解在乙醇中

，達到zhi定的濃度

。然后，根據(jù)文獻作者之前的研究

，采用溶劑擴散法

，將乙醇溶液在攪拌（500rpm），以0.1 mL/s的恒定速率

，通過注射器注入純水（體積比為：1：9）

。

關(guān)于材料和方法的所有詳細信息請參考support information。

結(jié)果：

圖片2.png

圖1：使用從4T1細胞和小鼠肝組織提取的脂質(zhì)制備的rLNP的尺寸分布（A

，B）和形態(tài)觀察（C

，D）。比例尺：200 nm

。

圖片3.png

圖2：4T1細胞中

，未修飾（上）和生物素修飾（下）的C6標(biāo)記rLNP的時間依賴性細胞攝取譜。比例尺：50μm

圖片4.png

圖3：rLNPs的生物相容性測定

。（A）用不同濃度的rLNP處理1小時后2%紅細胞的溶血

。插入的圖像顯示不同組的上清液。（B）小鼠的體重變化每隔一天靜脈注射rLNPs（100mg/kg）

，持續(xù)14天

。數(shù)據(jù)顯示為三個獨立結(jié)果的平均值和標(biāo)準(zhǔn)差。（C）從給藥結(jié)束時從受體獲得的主要器官制備的HE組織病理學(xué)切片

。比例尺：100μm

。

圖4：rLNPs的體內(nèi)腫瘤積聚測定。將游離ICG（左）和ICG標(biāo)記的rLNP（右）靜脈注射到原位4T1荷瘤小鼠中

，并通過實時成像觀察受試者在6（A）

、24（B）和48小時（C）時的ICG信號分布。在注射后48小時

，切除一名受試者的主要器官和腫瘤組織進行離體成像（D）。（E）靜脈內(nèi)給予游離Dox和rLNP/Dox（Dox劑量：5mg/kg）后4T1荷瘤小鼠的時間依賴性組織/血漿Dox濃度

。Dox濃度分別表示為組織的μg/g組織和血漿的μg/mL

。數(shù)據(jù)顯示為三個獨立結(jié)果的平均值和標(biāo)準(zhǔn)差*P<0.05

圖6：rLNP/Dox的體外抗癌性能

。（A）孵育24小時后，游離Dox和rLNP/Dox對4T1細胞的濃度依賴性細胞毒性

。數(shù)據(jù)顯示為三個獨立結(jié)果的平均值和標(biāo)準(zhǔn)差

。（B） MCTS與游離Dox或rLNP/Dox（Dox濃度：1μg/mL）孵育4天后的圖像。比例尺：500μm

。左側(cè)的定量結(jié)果表示MCTS的相應(yīng)體積

圖片7.png

圖7：rLNP/Dox的體內(nèi)抗癌性能

。（A）腫瘤體積變化和（B）HE和Ki67染色后的離體腫瘤切片的代表性圖像。比例尺：100μm*P＜0.05

。

結(jié)論：

總之

，在本研究中，作者提出了rLNPs的概念和制備方法

，并展示了其作為多功能藥物遞送載體的潛力

。它們的優(yōu)點包括：（1）從細胞和組織制備的重復(fù)性高；（2）用熒光分子進行柔性標(biāo)記

，并對靶向配體和可能的其他功能部分進行修飾

；（3）高生物相容性；（4）能夠裝載各種分子/藥物

；以及（5）作為藥物載體具有良好的體外和體內(nèi)抗癌性能

，這可以通過負載其他種類的藥物進一步擴展到治療其他疾病。在未來的工作中

，作者將重點關(guān)注以下幾個方面：（1）將rLNPs的應(yīng)用擴展到不同的藥物和其他疾病模型

；（2）探討rLNPs是否具有細胞/組織特異性功能；和（3）闡明是否可以使用rLNP實現(xiàn)細胞/組織訓(xùn)練

，因為它們包含母體細胞/組織的脂質(zhì)組學(xué)

。

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