，包括蛋白激酶PKR。
雖然這種**可能有利于對mRNA疫苗產(chǎn)生免疫反應(yīng)，但直接作用是通過eIF2a的PKR磷酸化來下調(diào)翻譯，這樣損害了eIF2的活性，抑制了mRNA翻譯，從而抑制了免疫原的蛋白質(zhì)合成。消除這種先天免疫反應(yīng)的主要方法是將天然存在的核苷如1-甲基二脲苷和核糖體RNA(通常不在mRNA中)中存在的其他核苷替換到mRNA序列中，這使得它不能被先天免疫傳感器檢測到。這種核苷修飾的免疫應(yīng)答mRNA是mRNA技術(shù)的基礎(chǔ)，該技術(shù)近在BioNTech/輝瑞和Moderna疫苗試驗(yàn)中顯示了超過94%的有效性，這些技術(shù)是建立在對其他病原體試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，下文將詳細(xì)描述。
由于TLR7和TLR8主要識(shí)別富含GU的單鏈RNA序列，CureVac采用了第二種方法包括密碼子優(yōu)化和盡量不使用鳥苷酸。mRNAzhi療的第二個(gè)難點(diǎn)是其對核酸酶的敏感性，例如在它血清中的半衰期< 5分鐘。盡管siRNA的化學(xué)修飾在提高穩(wěn)定性和降低免疫原性方面非常成功，但迄今為止，由于翻譯機(jī)制對化學(xué)修飾的敏感性，使得它們在mRNA修飾并不成功。mRNA的第三個(gè)難點(diǎn)是大多數(shù)細(xì)胞類型（除不成熟的樹突細(xì)胞外）缺乏對裸露的mRNA的細(xì)胞攝取吸收。
后兩個(gè)難點(diǎn)可以通過將核苷修飾或mRNA導(dǎo)入適宜遞送系統(tǒng)來解決，這樣既保護(hù)mRNA免受核酸酶的攻擊，又促進(jìn)細(xì)胞攝取。比如，當(dāng)在動(dòng)物模型中給藥時(shí)，與裸露的mRNA相比，加入納米顆粒脂質(zhì)體可保護(hù)mRNA免受核酸酶的攻擊，并增強(qiáng)細(xì)胞攝取和表達(dá)高達(dá)1000倍。
質(zhì)粒DNA主鏈通過體外轉(zhuǎn)錄(IVT)產(chǎn)生zhi療性mRNA，其帶有5’端的帽子結(jié)構(gòu)、5’端的非翻譯區(qū)(UTR)、編碼目的蛋白開放閱讀框、3’端UTR和polyA尾。天然真核生物的5’端帽子(cap0)是一種倒置的7-甲基鳥苷(m7G)，通過5’-5’三磷酸鹽與mRNA的**個(gè)核苷酸相連。
Cap0保護(hù)內(nèi)源性mRNA免受核酸酶攻擊，參與核輸出，與翻譯起始因子4結(jié)合
，啟動(dòng)蛋白質(zhì)翻譯。另外兩個(gè)5’端帽子結(jié)構(gòu)被證實(shí)(帽子1和帽子2)在第二個(gè)或第三個(gè)核糖核苷酸上含有額外的甲基
，其免疫原性低于cap0(因此更佳)
。目前常用的加帽方法包括共轉(zhuǎn)錄加帽，產(chǎn)生具有高翻譯和低免疫原性的帽子1
。5’端UTR參與翻譯起始
，包含一個(gè)Kozak序列以及一個(gè)非帽依賴翻譯的核糖體進(jìn)入位點(diǎn)。開放閱讀框之后是3’端UTR
，它影響mRNA的穩(wěn)定性和蛋白質(zhì)表達(dá)的持久性
。polyA尾在大約100個(gè)殘基上編碼，有助于啟動(dòng)翻譯和延緩降解
。體外轉(zhuǎn)錄（IVT）生產(chǎn)的mRNA需要經(jīng)過純化
，以去除具有免疫原性的DNA和雙鏈RNA污染物。
上述的mRNA可以是核苷修飾的，也可以是未經(jīng)核苷修飾的序列，但不能進(jìn)行自我復(fù)制。能夠復(fù)制的自擴(kuò)增mRNA (samRNA)也正在進(jìn)行臨床試驗(yàn)測試，其長度約為10 kb，由于它們有四個(gè)額外編碼的非結(jié)構(gòu)基因，包括一個(gè)RNA依賴的RNA聚合酶，導(dǎo)致了細(xì)胞內(nèi)的自復(fù)制，但由于缺乏結(jié)構(gòu)基因，不會(huì)產(chǎn)生感ran性粒子。
samRNA不能被核苷修飾，因?yàn)檫@些修飾會(huì)干擾自身擴(kuò)增。在目前的臨床試驗(yàn)中，由于samRNA的擴(kuò)增過程，其通常使用較低的劑量(1-10 µg)，而非擴(kuò)增的mRNA則需使用30-100 µg。表1總結(jié)了目前所有上述類別在進(jìn)行人體臨床測試的mRNA疫苗。這些臨床試驗(yàn)中的所有mRNA遞送系統(tǒng)都是納米顆粒脂質(zhì)體。
BioNTech/輝瑞LNP和Moderna LNP已經(jīng)公開其確切方，而其他一些公司尚未公開。其他產(chǎn)品很可能與Alnylam公司的 OnpattroTM產(chǎn)品相似(下文將進(jìn)一步描述)，就像已經(jīng)公開的產(chǎn)品，可能都包含用的可電離脂質(zhì)
。雖然所用的特定可電離脂質(zhì)可能未知
，但其常用種類可以從期刊和**出版物中了解，如表1所示
。
表1：目前在進(jìn)行人體臨床測試采用納米顆粒脂質(zhì)包裹的mRNA疫苗總結(jié)如下。臨床試驗(yàn)中的所有mRNA疫苗都使用納米顆粒脂質(zhì)體進(jìn)行遞送。其類別和組成尚未公開
，因此基于現(xiàn)有文獻(xiàn)和**
，它們可能的類別如下所示。
在之前，mRNA疫苗用于傳染病的臨床前和臨床研究
，包括流感、寨卡病毒
、艾zi病毒
、埃博拉病毒、狂犬病
、基孔肯雅病毒
、瘧疾、生殖器皰疹
、弓形蟲等
。這些研究被總結(jié)在近的一些綜述中。
COVID-19
SARS-CoV-2
LNP：脂質(zhì)納米顆粒
CNE:陽離子納米乳劑
NLC納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體
PBAE：聚β氨基酯
PACE：聚(胺-共-酯)
Epo
hPBAE：超支化聚β-氨基酯
PEI：聚乙烯亞胺
pABOL：二硫化物連接的聚酰胺基胺
SPLP：質(zhì)粒-脂質(zhì)顆粒
SNALP：核酸脂質(zhì)顆粒
IFN：干擾素
HAI：血凝抑制試驗(yàn)
CVnCoV：CureVac mRNA LNP
mAbs：單克隆抗體
VHH:Vh結(jié)構(gòu)域
M2e:基質(zhì)蛋白2外域
Tfh：濾泡輔助T細(xì)胞
15692161719
聯(lián)系方式
15692161719
86-21-58876118
